Серологические методы при хламидийной УГИ

Применение серологических методов: реакции связывания комплемента (РСК), реакции торможения гемагглютинации (РТГА), реакции диффузной преципитации в агаре (РДПА), реакции нейтрализации (РН), реакции макроагглютинации (РМАг), метода флюоресцирующих антител (МФА) или как его еще называют реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и др. при заболеваниях урогенитального тракта, обусловленных хламидийной УГИ, до сих пор недостаточно широко использовались из-за отсутствия высокоактивных специфических антигенов и трудностей получения гипериммунных сывороток, поэтому вопрос о пригодности серологических методов для диагностических целей долгое время оставался открытым.
Для выявления антител в сыворотках больных с хламидийной УГИ используется групповой антиген. Однако результаты РСК бывают недостаточно четкими, нерегулярными.
Антигены. Материал соскобов из цервикального канала шейки матки и уретры, используемый как антиген или групповой эфирно-ацетоновый антиген ПЛТ, дает недостаточно четкие и нерегулярные результаты в серологических реакциях. В связи с этим рекомендуется использовать в качестве антигена желточные мешки КЭ, инфицированные возбудителем хламидийной УГИ. Антигены готовят на фосфатном буфере из инфицированных желточных мешков в виде 20% суспензии, содержащей большое количество хламидий (титр 10 6-107 ЕЛД50 в 0,5мл).
Существуют различные методы приготовления антигенов и используются групповой фенолизированный, групповой эфирно-ацетоновый, корпускулярный фреоновый, корпускулярный трипсиновый, групповой кипяченый антигены и др.
За титр антигена принимают такое разведение, которое дает с наибольшим разведением ионной сыворотки специфическую задержку гемолиза. Рабочее разведение антигена равно двойному титру. Если титр специфического антигена хламидийной УГИ 1:32, то в опыт берут антиген в разведении 1:16.
Сыворотки. Кровь берут из вены в количестве 3-5 мл, помещают в стерильную пробирку и ставят в термостат на 20 мин. После этого с помощью пипетки сгусток крови отделяют от стенок пробирки, последнюю помещают в рефрижератор при 4°С. Перед опытом ее инактивируют в течение 30 мин при 56°С. Сыворотки должны быть прозрачные. Мутные, хилезные не используются.
С помощью концентрированного, очищенного урогенитального антигена удается выявить комплементсвязывающие антитела а титре 1:16 - 1:32 и выше у подавляющего большинства больных с заболеванием мочеполового тракта, названного хламидийной УГИ.
Реакция связывания комплемента (РСК)
Основные приемы постановки РСК для диагностики урогенитального заболевания такие же, как и в бактериологической практике. Однако имеются некоторые отличия, обусловленные особенностями приготовления высоко активного специфического антигена.
Известно, что в сыворотках людей, переболевших хламидийной УГИ, появляются комплементсвязывающие антитела. Они обладают видовой и групповой специфичностью, что позволяет, по данным РСК, установить групповую принадлежность хламидии. С помощью РСК удается показать, что выделенные штаммы возбудителя УГИ из шейки матки женщин, больных цервицитом или уретритом, и из уретры их мужей содержат комплементфиксирующие антигены, которые друг другу по антигенным признакам родственны.
При исследовании в РСК сывороток больных хламидийной УГИ удается выявить комплементсвязывающие антитела в 57,9% случаев и лишь в 1,6% случаев получить неспецифические результаты. Исследование парных сывороток в РСК показывает незначительное повышение титра антител, что является характерной особенностью возбудителя хламидийной УГИ. В связи с этим не следует ожидать появления антител в высоких титрах. Нижний титр выявленных в динамике инфекции комплементсвязывающих антител бесспорно демонстрирует гуморальную реакцию макроорганизма, что может быть использовано с диагностической целью.
Реакция нейтрализации
Нами изучалась нейтрализующая активность сывороток больных людей, страдавших хламидийной УГИ обезьян, а также кроликов, морских свинок, белых мышей и хомяков, иммунизированных лабораторными штаммами возбудителя хламидийной УГИ.
В реакции нейтрализации использовали предварительно вытитрованную дозу возбудителя УГИ (обычно 100 ЛД50, которую смешивали с равным объемом нескольких разведений испытуемых сывороток, начиная с 1:4 с двукратным интервалом до 1:256 на растворе фосфатного буфера. Смесь встряхивали и переносили в термостат при 35°С в течение 30-45 минут. Затем каждую смесь вводили по 0,25 мл в желточные мешки КЭ. На одно разведение использовали 4 эмбриона. Параллельно ставили контроли со смесью инфекционного материала с нормальной сывороткой того же разведения, а также без сыворотки. Учет опыта нейтрализации проводили, начиная с 5 дня.
При изучении нейтрализующей активности сывороток больных УГИ людей, обезьян, иммунизированных лабораторных животных (морских свинок и хомяков), мы не наблюдали резких отличительных признаков специфической нейтрализации. В отдельных случаях была выявлена низкая нейтрализующая активность сывороток больных УГИ людей и несколько большая в ряде сывороток иммунизированных животных.
Реакция макроагглютинации (РМАг)
Было проведено испытание 14 антигенов возбудителя УГИ и 2 антигенов возбудителя трахомы. В опытах использовались сыворотки людей, больных цервицитом, уретритом, обусловленные возбудителем УГИ, сыворотки обезьян, зараженных агентом УГИ, сыворотки иммунизированных животных, а также а качестве контроля использовались иммунная трахомная сыворотка обезьян (шт. Зубкова), человеческая сыворотка LGV (венерическая лимфогранулема), нормальная сыворотка человека и обезьяны.
Проведенное нами исследование в РМАг показало, что антигены УГИ не обладали высокой видовой специфичностью, икая положительные реакции не только с гомологичными сыворотками, но и сыворотками этой же группы, а именно с именной трахомной сывороткой и сывороткой LGV человека.
Способность ионной сыворотки вступать а реакцию с антигенами УГИ дает основание думать об известной степени родства между возбудителем трахомы и хламидийной УГИ. Мы провели обследование с помощью РМАг 144 женщин,страдавших УГИ, в результате эта реакция оказалась положительной у 142, отрицательной - у 1 и сомнительной - у 1. Среди мужей и сексуальных партнеров РМАг оказалась по-
ложительной у 112 и сомнительной - у 1. Из 113 обследованных сывороток женщин, не больных УГИ (контрольной группы 117 чел.), подобным свойством не обладали.
Таким образом, специфический урогенитальный антиген и глютинировался только сыворотками больных и не вступал в реакцию с нормальной сывороткой человека, в связи с чем РМАг может быть рекомендована для лабораторной диагностики гениталыюго хламидиоза. В диагностике вирусных заболеваний широко применяется реакция торможения гемаггютинации, которую следует использовать также для диагностики хламидийной урогенитальной инфекции.
Реакция торможения гемапглютинации (РТГА)
Эту реакцию ставят по общепринятой методике. В реакции следует использовать 1 % взвесь эритроцитов обезьяны, 1% взвесь эритроцитов белой мыши или 1% взвесь эритроцитов курицы. Чувствительность эритроцитов барана, кролика гуся и морской свинки значительно ниже, поэтому лучше их не использовать.
Гемагглютинирующей способностью обладают не только взвеси желточных мешков КЭ, но и культуральные жидкости тканевых культур, зараженные хламидиями, которые могут служить антигенами возбудителя УГИ.
РТГА дала положительные результаты у всех больных УГИ, у которых был выделен этот возбудитель из гениталий, т.е. наблюдалось 100% совпадение результатов.
РТГА оказалась положительной у всех иммунизированных 110 животных (в разведении 1:16 и 1:32). Подобные результаты были получены нами при обследовании 128 людей, больных хламидийной УГИ. Так реакция оказалась положительной у всех, в том числе у 127 чел. в разведении 1:32 и у одного - 1:16. Контрольные сыворотки (здоровых людей) в РТГА дали отрицательный результат .
Наличие в составе возбудителя УГИ гемагглютинина, способного агглютинировать эритроциты кур, белых мышей и обезьян, позволяет использовать эту реакцию наряду с РСЕ для диагностических целей при инфекционных заболеваниях гениталий, вызванных хламидиями, а также при стертых или латентных формах этой инфекции.
Приведенный ряд серологических исследований позволяет нам не только отметить своеобразие возбудителя хламидийной УГИ, но и наметить перспективы их использования для научных и практических целей.

Опубликовано на сайте 22:33 | 12/07/2015


Серологические методы при хламидийной УГИ

Читайте также:

  • Норплант.
  • Хламидийная УГИ и бесплодие у женщин и мужчин.
  • Посткоитальная контрацепция.
  • Хирургическое лечение образований яичников лапароскопическим доступом.

  • Серологические методы при хламидийной УГИ



    Комментарии к статье:

    Автор: Гость

    Комментарий:
    А какие еще реакции используются при заболеваниях урогенитального тракта?


    Вы всегда можете оставить свой комментарий ниже.


    Поделись этой статьей с другими. Уже поделились 179 человек.

    Метки записи:  
    Оставьте комментарий к этой записи ↓

    Ваше имя *

    Ваш email *

    Ваш сайт

    Ваш отзыв *

    * Обязательные для заполнения поля
    Внимание: все отзывы проходят модерацию.